DNA polimerazların dört temel özellikleri araştırmalar için ihtiyacınız olan en iyi enzimi tanımlar :
Bu dört değişkenin farklı konfigürasyonları ile farklı DNA polimerazlar üretilmektedir. Bunlar:
Aşağıda belirtildiği gibi PCR enzim seçimini gerçekleştirebilirsiniz:
|
Standart DNA Polimerases
Rutin PCR için uygundur. Örneğin,amplifiye edilmiş ürün
ve ürün boyutu tespiti, T/A klonlama vektörleri içine
doğrudan ekleme yapma ve tek merkezli A kuyruk üretimi
Hot-start (HS) Polymerases
Kurulum sırasında spesifik olmayan bir ürün amplifikasyonunu
baskılayarak istenen ürünün verimini arttırmak için kullanılır.
Hot-start ,DNA kalıp miktarı düşük olduğunda, DNA kalıplarının
oldukça karmaşık yapıda ya da multiplex PCR’da olduğu gibi birden
fazla primer çifti olduğunda kullanışlıdır.
High-fidelity polymerases
Bunlar, uzayan DNA zincirindeki hatalı bazların eşleşmesini
önlerken kalıp DNA dan yapılan DNA sentezinin doğruluğunu
arttırır.Amplifie ürünün kolonlanması ve ekspresyonu, mutagenesis çalışmaları ve ilgili uygulamalarda proofreading özellikli enzimler kullanılmalıdır.
Polymerases for amplification of long amplicons
Uzun amplikonların amplifikasyonları, standart DNA polimeraz processivity özelliği ile proofreading polimerazların doğruluğu özelliklerinin kombinasyonudur.Bu,genomik DNA dan 25kb kadar uzun amplikonlar vermek için, iki polimeraz ile optimize edilmiş bir tamponun karıştırılmasıyla elde edilir
ÖZELLİKLER VE UYGULAMALAR
Hot-Start Hot Start DNA polimeraz spesifik olmayan ürün amplikasyonunu ve primer-dimer oluşumunu baskılayarak istenilen ürünün verimini arttırmak için kullanılır. Hot Start PCR, DNA kalıbının çok kompleks olduğunda, düşük miktardaki DNA kalıplarının amplikasyonlarında ve multiplex PCR uygulamalarında oldukça kullanışlıdır. | Fast PCR Hiçbir DNA polymerases 30 dakikadan daha az sürede PCR yapamaz ve 1kb/30 saniye’den daha az extention oranına sahip değildir. Yüksek doğrulukta ürün elde etmek için işlem hızı önemlidir
|
High-Fidelity Fidelity, polimeraz tarafından yanlış bir nükleotidin eklenme sıklığı ile ilgilidir. High-fidelity DNA polimerazlar amplifikasyon hatalarını en aza indirir ve ürün daha sonra klonlamada ,sekanslamada ve ekpresyonda kullanılır.Bu polimerazlar, down-stream taramalar için gereken hatasız yapıları elde etmek için harcanan zaman ve emek ihtiyacını ortadan kaldırır, tasarruf sağlarlar. | Multiplex PCR Multipleks PCR farklı DNA dizilerine özgü olan çeşitli boyutlarda amplikonları üretmek için tek bir PCR karışımı içindeki çoklu primer setlerinden oluşur.Multipleks PCR, çeşitli örnekler içindeki aynı amplikonların karşılaştırılmasında da bir tarama testidir. |
High Specificity PCR Specificity amaçlanan hedef sekansın bir ve yalnızca bir amplifikasyon ürünü üretmesi ile ilişkilidir. Bu yalnızca hot-start ile ilişkili olmayıp buffer bileşimi ve DNA polimerazın ne kadar iyi optimize edildiği ile de ilişkilidir. | GC-Rich PCR GC açısından zengin PCR ,GC içeriği > % 60 dan fazla olan DNA kalıpları ile ilgilidir.Bu yüksek GC içeriği, thermo stabilitenin yüksek olmasını gerektiri ki bu birçok standart Taq enziminin gösteremeyeceği bir performanstır. |
Standard PCR Standart bir DNA polimeraz, amplifiye edilmiş ürün tespiti ve ürün boyutunun belirlenmesi gibi genel amaçlı PCR için kullanılır.Bunlar, 3'-ucunda 'A' çıkıntıları üreterek doğrudan T / A klonlama vektörleri içine klonlanmasına olanak sağlarlar | Genotyping PCR Genotipleme PCR, genom içinde spesifik bölgelerin amplikasyonu ve karşılaştırılması ile bireylerin genetik farklılıklarının belirlenmesi sürecidir. |
Long PCR Long PCR, DNA uzunluğunun amplikasyonuna değinmekte ve rutin polimeraz ve reaktifler kullanılarak ampfiliye edilememektedir | Low-Copy PCR Low-copy kalıpları non-spesifik bantların sebep olduğu yanlış pozitif sonuçların riskini azaltmak için yüksek duyarlı ve spesifik DNA polimeraz gerektirir. |
Direct Gel Loading Kırmızı boya ,bizim polimeraz tamponların çoğunda mecvuttur.PCR dan sonra örnekler ilave bir tampon gerektirmeden doğrudan agaroz jel üzerine yüklenebilir. | |
| | | | | | | |
Properties |
| ||||||
Template Length | ≤5kb | ≤5kb | ≤10kb | ≤25kb | ≤10kb | ≤5kb | ≤5kb |
Hot-Start |
| – |
|
| – | – |
|
High-Fidelity | – | – |
| – |
|
| – |
High Specifity PCR |
| – |
|
| – | – | – |
Pre Mix |
|
|
|
| – |
|
|
Direct Loading |
|
| – | – | – | – | – |
Applications |
| ||||||
Standard PCR |
|
|
|
|
|
| – |
Long PCR | – | – |
|
| – | – | – |
Fast PCR |
|
|
| – |
| – |
|
Multiplex PCR |
|
|
| – | – | – | – |
GC-Rich Templates |
|
|
| – | – | – |
|
Genotyping |
|
|
| – | – | – |
|
Low-Copy PCR |
| – |
| – |
|
|
|
Universal Polymerases |
| – |
| – | – | – | – |
Bisulfite PCR | – | – | – | – | – | – |
|
TA Cloning |
|
|
|
| – | – |
|
Blunt-End Cloning | – | – | – | – |
|
| – |
Colony PCR |
|
| – | – | – | – | – |
Best choice 
Recommended 
Suitable
THE PCR COMPANY
Bioline-PCR Şirketi,
Bioline 22 yıldır geniş bir uygulama yelpazesi ile yüksek performanslı PCR enzimleri portföyü üretmekte ve geliştirmektedir.Bu süre boyunca,yüksek verim PCR için çok sayıda enzim,tampon sistemleri ve bileşenleri kinetik reaksiyonları ve süreçleri daha iyi anlamak için analiz edilmiştir. Bu alandaki araştırmalar sonucunda Bioline nın DNA polimerazlarından MyTaq™, MyFi™ and RANGER ürün serileri güvenilir ve tekrar edilebilir yüksek hassasiyete sahiptirler.
Üstün Kullanım
Sadece polimeraz performansı geliştirmekle kalmamış,aynı zaman da kolay kullanım PCR deneyleri de geliştirilmiştir.En popüler PCR enzimlerinin çoğunda 2x master miksleri kullanım için hazırdır. Bu miksler en iyi sonuçları sunmak için önceden optimize edilmiştir.Yüksek hassasiyete erişmek için basitçe primerleri ve kalıbı ekleyin.Ve sonraki yayın veya raporunuz için yüksek verimli sonuçlar elde edin.Birçok polimerazlar ve karışımlar görselleştirmeyi geliştirmek ve doğrudan jele yüklemeyi etkinleştirmek için kırmızı boya avantajına sahiptir.
Bioline DNA Polimerazlar
Her bir DNA polimerazlar spesifik PCR uygulamalarına göre özelliklere sahiptir. Belirli bir deneyde en iyi sonuçları elde etmek için,en uygun polimerazı seçmek çok önemlidir. Bu kılavuz en uygun DNA polimeraz seçimi için size yardımcı olmayı amaçlamaktadır.
Kendini Pazarlayan Ürünlerimiz
Sizi küresel müşterilerimiz tarafından sağlanan karşılaştırmalı PCR verileri ile buluşturmak için Bioline Akademiğe davet ediyoruz. Bizim temekl uzmanlık ve odak noktamız PCR alanımızdır. PCR şirketi olarak adlandırılmaktan gurur duyuyoruz.
Epigenetik, DNA sekansını değiştirmeyip DNA, protein ve RNA’ların fonksiyonunun ve regulasyonunun değişimi ile sonuçlanan modifikasyonları içerir. Embriyo sürecinden itibaren epigenetik patern hücreye ve dokuya özgü olarak gelişmekte, hücre farklılaşması ve fenotipi oluşturmaktadır…
Çoğu DNA metilasyon analizinde bisülfit conversiyonu yapılmış DNA numunesi kullanılmaktadır. Bisülfit conversiyon işlemi DNA numunesinin fiziksel ve kimyasal özelliklerini dramatik olarak değiştirmektedir….
Başarılı PCR iki kritik bileşime bağlıdır. En iyi sonucu verecek şekilde optimize edilmiş reaksiyon buffer ve yüksek kaliteli thermostable DNA polymerase (Taq DNA polymerase gibi)….
DNA’nın metilasyon statüsünü belirlemek için sodium bisulfite treatment yöntemi gold standart olarak kabul edilmektedir.
